在人工授精前，首先选好雄蜂，强迫排精，采集精液，选择好处女王，然后进行人工授精。将蜂王麻醉后，调整显微镜，在镜下移动背腹钩操纵杆，使背腹钩在控针配合下，分别勾住背腹板顶端的中央位置，并向外侧拉动背腹板，使其间距为3毫米至4毫米，然后再移动背钩，使其膨大部分嵌入到鳌针腔基部的三角缝内，再拉动背腹钩，把背腹板间距拉至5毫米至6毫米。鳌针腔打开后，调整蜂王和针头的角度，排除针头尖中的生理液和气泡后，使针尖接近阴道口，用控针压住瓣突，将针尖徐徐推进阴道，直至中部输卵管，取出控针，将精液慢慢注入。
一次性授精一般注入8微升精液；多次性授精每次各注射4微升至5微升精液，其间隔24小时至48小时。授精完毕，10秒至15秒后退出针头，取出蜂王，点上标记，待其复苏后，送回核心群或框式王笼暂时贮存。
受精蜂王要严加管理，使其得到工蜂的饲喂，保证受精蜂王所在蜂群的蜂数，以便调节巢温，将蜂王剪翅或幽闭巢门，防止蜂王外出。
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